La PCR (Polymerase Chain Reaction) è un metodo attraverso cui una sequenza di acido nucleico più essere amplificata esponenzialmente in vitro.È necessario che le estremità della sequenza da amplificare siano conosciute con sufficiente precisione per poter sintetizzare degli oligonucleotidi che saranno ibridizzati ad esse, e che una piccola quantità della sequenza sia disponibile per dare inizio alla reazione.Un tipico ciclo di PCR:1. Denaturazione al calore di uno stampo di DNA che deve essere copiato (94 - 99 °C)
2. Appaiamento (annealing) di coppie di oligo, (30 - 65 °C)
3. Estensione da parte di DNApol termoresistente a partire dai primer. (65 - 72 °C).
Durante il primo ed ogni successivo ciclo di reazione, l'estensione di ogni oligonucleotide sullo stampo originale produrrà una nuova molecola di ssDNA di lunghezza indefinita. "Questi prodotti lunghi" si accumuleranno in maniera lineare, cioè la loro quantità dopo un numero qualsiasi di cicli sarà linearmente proporzionale allo stesso numero di cicli. I "prodotti lunghi" originati in questo modo fungeranno da stampi per l'uno o l'altro degli oligonucleotidi durante i cicli succcessivi, e l'estensione di questi oligonucleotidi dalla polimerasi produrrà molecole di una lunghezza definita, corrispondente a quella della sostanza di interesse. Queste molecole fungeranno anch'esse come stampi per l'uno o per l'altro oligonucleotide producendo altre molecole di grandezza definita. In questo modo si svilupperà una reazione a catena che porterà all'accumulo di uno specifico dsDNA in maniera esponenziale rispetto al numero di cicli di reazione. Il grado di amplificazione finale è dato da 2^(n-2) dato che i primi due cicli sono nulli.
Il materiale di partenza per la PCR è il DNA che contiene la sequenza che deve
essere amplificata; non è necessario isolare questa sequenza dal momento che essa
viene individuata dai primers.
La quantità di DNA necessaria per la PCR è veramente piccola (meno di 1 μg di
DNA genomico totale, ma a volte basta una singola molecola di DNA).
Applicazioni della PCR:
- Diagnosi infezioni batteriche e virali
- Diagnosi HIV
- Diagnosi di Tubercolosi
- Diagnosi cliniche di malattie causate da mutazioni
- Diagnosi prenatale
- Controllo efficacia terapie anti-cancro
- Determinazione del sesso
- Studi evoluzione molecolare
2 commenti:
Salve mi chiamo Marco; sono un ragazzo di 23anni e vorrei discutere con persone appropriate riguardo la mia teoria. Si tratta di "clonazione virtuale". Cercando sul web mi sono imbattuto con stupore in tale blog. Ritengo che la "clonazione virtuale" sia davvero molto importante.. credo di aver trovato la chiave per poter dare inizio a delle ricerche davvero molto importanti.. . ho paura a divulgare il contenuto della mia teoria a persone sbagliate.. il mio contatto è:
(marko128@hotmail.it)
contattatemi..
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